应该用什么孔径的微孔滤膜富集肿瘤细胞？
导读:天津津腾对不同孔径微孔滤膜富集肿瘤细胞进行研究。分别测定活性K562细胞、固定的K562细胞及血液样本通过孔径为1、3、5、8、10μm滤膜的滤过率。
来源：未知
发布日期：2019-11-12 09:53【大 中 小】
天津津腾实验设备有限公司认为由于循环肿瘤细胞在血液中含量很少，与白细胞、红细胞相差悬殊，这又给循环肿瘤细胞的检测带来极大的困难与挑战，因此循环肿瘤细胞的富集就非常重要。现有的富集方法主要包括免疫磁分离法、梯度离心法、微流控技术以及膜滤过分离法等。但是，前两种富集方法假阳性假阴性高、敏感性差;微流控技术灵敏度较高，但成本高;而基于细胞大小的膜滤过分离技术与微流控原理类似，具有操作简单、检测成本低、敏感性高等特点，在临床应用中极具优势。现有的针对膜过滤富集循环肿瘤细胞的方法多采用8μm滤膜，对于8μm以下滤膜的研究较少。有研究发现，细胞可穿过孔径比其自身直径小很多的滤膜，因此天津津腾进一步研究多种滤膜孔径与肿瘤细胞回收率之间的关系，以探索更理想的膜过滤富集循环肿瘤细胞方法。
1材料和仪器
K562细胞(中国医学科学院基础医学研究所细胞中心)，可换膜过滤器(北京凯乐思公司)，不同孔径(1、3、5、8、10μm)微孔滤膜(天津津腾实验设备有限公司)，10mL注射器(上海治宁公司)，IX荧光显微镜(日本Olympus公司)，DT5-1离心机(北京时代北利离心机公司)，ＲPMI1640培养基(美国Invitrogen公司)，胎牛血清(FBS，美国Hyclone公司)，4%多聚甲醛(北京索莱宝公司)，结晶紫溶液(北京鼎国盛公司)，红细胞裂解液(北京凯乐思科技有限公司)。
2细胞滤过率的测定
活性及固定的K562细胞滤过率的测定:分别取浓度为7.2×105～7.4×105/mL的活性的K562细胞及固定后的K562细胞200μL，通过1、3、5、8、10μm津腾微孔滤膜。1mL血液滤过率的测定:分别取1mL静脉血与裂解液按照1:10的比例混匀，8min后离心洗涤，再通过1、3、5、8、10μm津腾微孔滤膜;重复以上实验3次，计算每个样本滤过率:活性K562细胞滤过率(%)=回收液中活性K562细胞个数/实际所加活性K562细胞个数×100%，固定K562细胞滤过率(%)=回收液中固定K562细胞个数/实际所加固定K562细胞个数×100%，1mL血液的滤过率(%)=回收液中白细胞个数/实际所加1mL血液中白细胞个数×100%。
3结果
活性K562细胞、固定K562细胞及血液通过不同孔径的津腾微孔滤膜滤过率及时间的结果。活性及固定K562细胞通过1、3、5、8、10μm津腾微孔滤膜后，随着滤膜孔径增大，滤过率逐渐增大，活性的K562细胞滤过率明显大于固定后的K562。活性K562细胞及固定染色后的K562细胞均可穿过5、8、10μm滤膜，不能穿过1μm滤膜，固定K562细胞不能穿过3μm滤膜。同时，将1mL血液样本分别通过1、3、5、8、10μm津腾微孔滤膜，8和10μm的滤过率为64%左右，1、3、5μm滤膜的滤过率分别为0%、16.48%、44.23%。固定K562细胞过滤时浓度与时间的关系。使用不同浓度固定染色的K562细胞，分别通过1和3μm滤膜，相同条件下，使用1μm滤膜的过滤时间显著性大于3μm滤膜过滤的时间显著性(P＜0.01)。
4讨论
实际临床循环肿瘤细胞的大小在10μm以上，而固定的K562细胞的直径约为12μm，活性的K562细胞约为13μm，K562细胞与其他细胞系相比直径较小，但也在10μm以上，因此本实验采用与实际肿瘤细胞的大小相差不多的K562细胞进行富集的研究，从而可以更好地选出一种合适孔径的滤膜，以去除直径较小的白细胞，保留直径较大的肿瘤细胞。本实验天津津腾认为首先检测活性和固定的K562及血液通过不同津腾微孔滤膜的滤过率，选出1μm及3μm孔径滤膜用于肿瘤细胞的富集，同时结合1μm与3μm滤膜在过滤细胞的时间效率，进一步确定了3μm的微孔滤膜富集肿瘤细胞系。
5结论
本实验天津津腾实验设备有限公司发现其研究活性K562细胞、固定K562细胞及血液样本通过微孔滤膜的滤过情况，选取孔径为3μm的聚碳酸酯滤膜来完成循环肿瘤细胞的富集，同时检测不同条件下固定的肿瘤细胞通过3μm微孔滤膜的回收率及阳性率，为今后的临床肿瘤患者血液样本通过微孔滤膜富集并检测CTC提供了可行性的研究。但是，考虑到每毫升血液中CTC含量较少，仅为1～10个，而人体外周血来源容易，因此在完成实际临床样本检测时，可考虑检测较大量的样本，比如3mL血样，增加检出的回收率及阳性率，进一步确立从外周血富集回收肿瘤细胞的方法。
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