微孔滤膜在咖啡碱的快速测定中的作用
导读:本文天津津腾实验设备有限公司建立基于钛胶反相色谱固定相快速测定食品中可可碱、茶碱和咖啡碱的高效液相色谱法。同时浅谈了微孔滤膜在其快速测定中的作用。
来源：未知
发布日期：2019-11-12 10:37【大 中 小】
本实验天津津腾实验设备有限公司采用钛胶基质色谱固定相建立的反相HPLC可同时分离，分析结构相似的3种生物碱——可可碱、茶碱和咖啡碱，该法流动相成分简单且不含盐，仅为5%甲醇溶液，且采用等度洗脱，检测效率高、分离灵敏度高、检出限低、稳定性好。将此法应用于6种饮料样品中可可碱、茶碱和咖啡碱的测定，在重复性、回收率等方面均表现优异，结果令人满意。另外，本实验天津津腾实验设备有限公司也研究了3种生物碱保留的熵、焓和吉布斯自由能，从热力学的角度探讨3种生物碱在HPLC上的保留行为。
1材料与试剂
可可碱标准品（99%）、茶碱标准品（99%）、咖啡碱标准品（99%）上海源叶生物科技有限公司；甲醇（色谱级）美国Sigma公司；微孔滤膜（天津津腾实验设备有限公司）6种饮料样品市购。
2仪器与设备
1200系列HPLC仪美国安捷伦公司；SachtoporeRP色谱柱（250mm×4.6mm，5μm，300Å）美国Zirchrom公司；Lambda25紫外-可见分光光度计珀金埃尔默仪器有限公司；离心机，上海安亭科学仪器厂；万分之一天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司。
3方法
3.1标准溶液的配制
1.0mg/mL可可碱标准储备液：准确称取0.1000g可可碱标准品，用超纯水溶解并定容至100mL容量瓶中；2.0mg/mL茶碱标准储备液：准确称取0.1000g茶碱标准品，用超纯水溶解并定容至50mL容量瓶中；3.0mg/mL咖啡碱标准储备液：准确称取0.1500g咖啡碱标准品，用超纯水溶解并定容至50mL容量瓶中，以上各储备液均置于4℃冰箱保存备用。
3.2样品处理
饮料样品：准确量取5mL已提前超声脱气20min的样品，稀释2倍，过0.45mm津腾微孔滤膜，进行HPLC分析。固体饮料样品：准确称取0.5000g样品，加水溶解并转移至25mL容量瓶中定容，在60℃条件下采用超声波提取30min，随后在4000r/min条件下离心10min，上清液过0.45mm微孔滤膜，进行HPLC分析。
3.3色谱条件
流动相为水-甲醇（95∶5，V/V），等梯度洗脱；流速1.0mL/min；进样量20mL；检测波长273nm；柱温60℃。
4结论
钛胶基质色谱固定相在天然甲基嘌呤类生物碱如可可碱、茶碱和咖啡碱的快速、同时分析检测中展现出了优异的色谱性能，检测结果显示色谱峰峰形较好，可达到理想的测定效果，且其在线性范围、检出限以及加标回收率等方面均可达到分析要求。此外，HPLC条件（尤其是流动相）在较大程度上影响化合物的分离，流动相的试剂种类、梯度比例以及酸溶液的种类和浓度均可影响分离效果。在本实验天津津腾实验设备有限公司提出的色谱条件中，流动相中甲醇的比例仅占5%，无需添加任何缓冲盐，采用等度洗脱简便、快速。同时，可以避免碱性物质的不可逆吸附以及色谱柱的寿命随使用而快速缩短等弊端，充分体现了绿色高效、保护环境、节约资源等优点，适于推广普及。
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