津腾真空泵在检测万古霉素浓度方法中的应用

导读:本研究在采用HPLC测定万古霉素血药浓度的方法[16]的基础上，对色谱条件和样本前处理进行优化，以期能建立一种基于超高效液相色谱（ultraperformanceliquidchromatography，UPLC）技术的快速、

来源：未知发布日期：2020-03-16 09:31【大中小】

本研究在采用HPLC测定万古霉素血药浓度的方法[16]的基础上，对色谱条件和样本前处理进行优化，以期能建立一种基于超高效液相色谱（ultraperformanceliquidchromatography，UPLC）技术的快速、准确、灵敏的更适合临床常规TDM的方法，为降低药物检测及治疗成本，指导临床合理使用万古霉素提供理论参考。

1仪器与试剂
SHIMADZULC-30A高效液相色谱仪（日本岛津公司）、PhenomenexKinetexC18色谱柱（2.6μm，100mm×2.1mm）、XS205DU型分析天平（瑞士METTLERTOLEDO公司）、MultiReax漩涡混合器（德国Heidolph公司）、Eppendorf5427R高速冷冻离心机（德国Eppendorf公司）、SevenMultiS40K型pH计（德国梅特勒-托利多有限公司）、Eppendorf移液器（德国EppendorfAG公司）、无油隔膜真空泵（天津津腾实验设备有限公司）、T-50型溶剂过滤器（天津津腾实验设备有限公司）、容量瓶（日本ASone公司）、Milli-Q超纯水系统（德国Millipore公司）。

2流动相配制
精密称取磷酸二氢钾3.4g，加入1000mLMilli-Q水中，置于电动搅拌器上，用磷酸调节pH值为2.5，配制成25mmol/L磷酸二氢钾缓冲液，经0.45μm津腾微孔滤膜抽滤。

3沉淀剂的配制
精密称取8.63g七水合硫酸锌，加水溶解并稀释混匀，配制成0.3mol/L硫酸锌溶液，4℃避光密封保存，作为沉淀剂。本研究结果显示，UPLC检测血清万古霉素浓度的线性范围为2.0～99.6μg/mL，定量限和检测限分别为1.0和0.1μg/mL，灵敏度和线性范围完全能够满足常规检测的要求。精密度评价结果显示，UPLC检测低、中、高浓度样本的平均批内CV分别为3.28%、2.21%、2.59%，批间CV分别为5.73%、2.75%、0.82%；3种浓度（2.0、19.9、79.6μg/mL）的加标样本平均加标回收率分别为104.06%、99.80%、100.19%，中浓度样本的携带污染率为0.57%，高浓度样本的携带污染率为0.19%。UPLC与HPLC（比对方法）测定质控样本的结果差异不大，一致性较好；测定患者样本的结果相关性良好，平均偏移为0.07%。

HPLC采用的是高比例的水相进行等度洗脱，进行样本分析时未用高比例有机相冲洗色谱柱，长时间使用时样本中的脂溶性物质易污染色谱柱。的色谱分析时间（15min）比文献报道的HPLC（8min）长，但有利于保护色谱柱，且2个目标峰在6min内全部出峰，适用于批量检测，文献报道的HPLC2个目标峰在7.5min内才完全出峰。uPLC前处理采用的是蛋白沉淀，方法快速、简便，而文献报道的HPLC采用的是液液萃取，需要在60℃条件下蒸干40min，操作较为繁杂、耗时。综上所述，本研究建立的基于UPLC技术测定血清万古霉素的方法具有重现性好、快速、简便、灵敏度高和准确度高等特点，可用于药物代谢动力学研究和TDM，为临床合理、安全用药提供保障。

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