隔膜真空泵在泡沬病毒样品制备中的作用
导读:天津津腾实验设备有限公司在本文浅谈了泡沫病毒样品的制备及0.33A隔膜真空泵在其制备中的作用。
来源：未知
发布日期：2019-11-05 13:42【大 中 小】
天津津腾实验设备有限公司在本文浅谈了泡沫病毒样品的制备及GM-0.33A隔膜真空泵在其制备中的作用。
随着对泡沫病毒研究的不断深入，目前已有大量实例运用pfＶ载体进行基因治疗。研究者们根据泡沫病毒载体及其靶细胞的特点，采取各种可能的策略（物理法、化学法等），对有关病毒转导的各方面进行探索和优化，以提高基因转移及表达效率，使具有可调控性的泡沫病毒载体更安全、更有效地应用于基因治疗。作为一个基因治疗的载体，泡沫病毒滴度的测定是一个必须要解决的问题，目前测定逆转录病毒滴度的方法有很多，无论是从核酸、逆转录酶还是从感染效率方面来检测病毒滴度都有人做过研究，但是以泡沫病毒为研究对象建立滴度检测方法的研究较少，而且对以上三种方法进行比较研究的则几乎没有报道。本研究天津津腾实验设备有限公司从核酸、逆转录酶以及感染效率三个水平进行了检测原型泡沫病毒滴度的比较研究，具有一定的创新性。
1仪器设备
生物安全柜（BCd-183YtS，苏州安泰）、数显恒温水浴锅（苏州国华）、液氮罐（YdS-10-80，四川东亚）、倒置显微镜（Ｘd-101，南京光电）、C02钢瓶（CELLL50，阳光）、C02培养箱（BHC-1300IIa/B3，HEraEuS）、蠕动泵（YZ1515，天津协达）、高压蒸汽灭菌锅（YＸQ-LS-50，博讯）、烘箱（101-1aB，泰斯特）、磁力搅拌器（MS20011，IＫa）、隔膜真空泵（GM-0.33II，天津津腾实验设备有限公司）、过滤器（天津津腾实验设备有限公司）、超低温冰箱（tHErMofISHErSCIEntIfIC）、电子天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）、离心机（5415d，EpPEndorf）、电子天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）、低速离心机（上海安亭科学仪器厂）、、掌上离心机（其林贝尔）、台式大离心机（上海安亭科学仪器厂）、5415r冷冻离心机（EpPEndrof）、5415d离心机（EpPEndrof）、-25℃冰箱（dW-YL270，中科美菱）
2原型泡沬病毒样品浓缩
（1）将收集的病毒上清置于50ml圆底离心管中，配平，在4℃12000g条件下离心10min，然后用一次性0.45pMl过滤器对所得的上清进行过滤，去除细胞碎片。
（2）将滤液与5×PEG8000＋Nacl按4:1的比例混合均勻，置于50min尖底离心管中，每20min混合一次，重复3-5次，4℃放置过夜。
（3）4℃4000g离心30min，小心地吸弃上清，倒置管子1-2min，使残余液体流尽，这时可看到白色病毒沉淀，将离心管置于冰上。
（4）加入4ml溶液S，用移液器轻轻吹打使病毒粒子溶解，然后4℃3000rpMl离心5min，将所得病毒上清转移至一个新的Ep管中，此步骤旨在去除残留的PEg8000。
（5）将病毒上清加入到15ml超滤管中，在4℃3000rpm条件下离心15min，得到浓缩后的原型泡沫病毒粒子，将其与腺病毒冻存培养基按1:1混匀，然后分装在成品管中，放入细胞冻存盒于-80℃冰箱放置两个小时后，从细胞冻存盒取出置于-80℃保存。
3结果
运用PCR技术检测原型泡沫病毒的gag基因，得到如下结果。天津津腾实验设备有限公司通过核酸水平的检测结果可知，本研究成功制备了原型泡沫病毒。
免责声明：文章仅供学习和交流，如涉及作品版权问题需要我方删除，请联系我们，我们会在第一时间进行处理。
