微孔滤膜在高效液相色谱法检测酸奶中的应用

导读:建立了高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FLD）测定酸奶中唾液酸含量的分析方法。该方法为：使用1moL/L甲酸80℃下水解样品2h，以4，5-亚甲二氧基-1，2-邻苯二铵盐（DMB）为衍生化试剂，在

来源：未知发布日期：2020-06-05 15:15【大中小】

目前，SA含量检测方法有很多，如薄层层析法、分光光度计法、高效液相色谱法以及液相色谱-质谱联用法。其中，比色法和高效液相-紫外检测法使用尤为常见。但是这两种方法特异性差，由于乳糖在SA最大吸收波长处也有吸收，对SA检测有干扰导致检测结果准确度不高，不适于酸奶中SA的检测。天津津腾实验设备有限公司了解到本文利用衍生化试剂（DMB）与SA的α-酮酸类结构产生特异性反应，以达到高特异性，消除乳糖对检测的干扰。通过优化水解和衍生化条件利用液相-荧光色谱法建立了一种简单、准确性高的酸奶中SA含量的测定方法。该方法可有效提高检测精度，避免酸奶中各种杂质干扰，同时灵敏度较高，可以满足酸奶及奶制品中SA含量检测的要求，并为相关研究提供技术支持。

1材料与方法
1.1材料与试剂
N-乙酰神经氨酸标准品（阿拉丁）；市售酸奶；甲醇、甲酸、乙酸（色谱纯）；DMB试剂、低亚硫酸钠、2-巯基乙醇（分析纯）；0.22μm天津津腾微孔滤膜；超纯水。

1.2仪器与设备
高效液相色谱仪，配荧光检测器UltiMate3000：美国Thermo公司；色谱柱，ZorbaxSB-Aq（4.6×50mm，3.5-Micron）：美国Agilent公司；高速冷冻干燥离心机，3-18K：德国Sigma公司；智能数显恒温水浴锅HH-2：巩义市予华仪器有限责任公司；分析天平，XS105：瑞士MettlerToledo公司。

1.3试验方法与条件
1.3.1试验方法
标准溶液配制：精确称取唾液酸标准品100mg于100mL容量瓶中，超纯水溶解并定容。天津津腾实验设备有限公司了解到使用标准储备液配成0.5μg/mL、1μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL浓度的系列标准工作液。样品前处理：称取1g（精确至0.0001g，大约含100～500µgSA）酸奶于100mL容量瓶中，加水至刻度处（使用温水进行溶解，需保证样品完全溶解）。取500µl的酸奶样品溶液与相同体积的甲酸（1mol/L）混合，在80℃下水解2h。水解后冰浴冷却，在15000rap/min下离心10min。取200µL离心后的上清水解产物和相同体积的DMB溶液混合，在80℃下加热50min。衍生后的样品冰浴冷却，再加入400µL水使之稀释。混匀后经0.22μm天津津腾微孔滤膜过滤，供液相分析。

2.结论
天津津腾实验设备有限公司了解到利用高效液相色谱-荧光检测法，通过优化过程中水解和衍生化条件，建立酸奶中唾液酸的含量检测方法。结果表明：使用1mol/L甲酸80℃下水解样品2h，与7mmol/L的DMB在80℃下衍生化50min，酸奶中唾液酸得到最大释放量，由外标法定量的标准曲线R2=0.9998，酸奶中唾液酸检出限达到0.2mg/L。该方法能克服酸奶中各种杂质干扰等问题，具有重复性好、精密度高、回收率高、低检出限、易操作等优点，能准确地检测酸奶制品中唾液酸的含量。同时，该方法可以广泛用于奶制品中唾液酸含量的检测，具有很好的应用前景。

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