微孔滤膜截留处理方法及原理
导读:本文天津津腾实验设备有限公司在开发空间细胞样品自动处理方面做了探索性研究，建立了以微孔滤膜截留细胞后进行处理的方法，设计了以多位阀为核心的多流路切换系统，进行了关
来源：未知
发布日期：2020-01-15 10:27【大 中 小】
本文天津津腾实验设备有限公司主要介绍了基于微孔滤膜截留的细胞样品处理方法及原理，从理论上进行了可行性分析，利用微孔滤膜截留细胞，实现其与培养基的分离，并在膜表面进行原位裂解与标记。设计了以多位阀为核心的多流路切换系统，结合微型隔膜泵驱动不同试剂流过细胞表面，从而实现系统功能，形成了一套可以自主控制的原理样机，并进行了功能验证。
1实验材料
微孔滤膜：天津津腾实验设备有限公司；孔径5μm，直径20mm，醋酸纤维素、混合纤维素、尼龙、玻璃纤维和聚丙烯滤器；北京北化黎明膜分离技术有限责任公司；直径25mm；特氟龙管；北京捷安杰科技发展有限公司；内径0.03英寸，外径1/8英寸；小型隔膜泵；上海协升商贸有限公司；P200-LIQ-12V多位阀；北京捷安杰科技发展有限公司；
2.微孔滤膜截留细胞后清洗及细胞内蛋白提取
(1)细胞清洗：培养神经胶质瘤U251细胞至对数生长期时收获，胰蛋白酶消化后加入新鲜培养基吹打悬浮。抽取适当体积上述细胞悬浮液并通过5μm微孔滤膜，将细胞截留在膜表面。在室温下，以低流速向滤器中通入生理盐水，清洗至滤液无色透明。
(2)细胞内蛋白提取：取1mLRIPA裂解液使其充满滤器，裂解膜表面截留的细胞，孵育30min，转移到离心管中，得到蛋白提取液。
3FITC衍生化甘氨酸液相色谱分析条件
本文天津津腾实验设备有限公司使用HPLC与本实验室自制的LED诱导荧光检测器联用，检测FITC衍生化的甘氨酸并记录衍生物色谱峰，液相色谱分析条件为：RIGOLL-3000高效液相色谱系统，DiamonsilC18反相色谱柱，进样量为20μL，流动相为甲醇：硼酸缓冲液（pH值9.37）=30:70，在每次试验完成后调整流动相比例为80%甲醇将未洗脱的FITC冲出再进行下一次分析。由于FITC与氨基酸必须在高浓度下反应才能得到较高的收率，在进行高效液相色谱分析前，需要对样品进行适当稀释，用0.22μm滤膜过滤后再进样分析。
