津腾滤器在测定莲子中黄曲霉毒素B1的作用

导读:天津津腾调查了解到目前，以适配体为识别元件的亲和柱已被用于血液、啤酒和花生中小分子目标物的前处理，如可卡因、赭曲霉毒素A(Ochratoxin，OTA)等。然而，用于富集净化中药材中

来源：未知发布日期：2020-05-14 14:54【大中小】

天津津腾调查了解到目前，以适配体为识别元件的亲和柱已被用于血液、啤酒和花生中小分子目标物的前处理，如可卡因、赭曲霉毒素A(Ochratoxin，OTA)等。然而，用于富集净化中药材中AFB1的AAC还未见报道。本研究以无毒的N-羟基硫代琥珀酰亚胺活化的琼脂糖替代传统亲和柱中使用的高毒性溴化氰活化的琼脂糖作为固相载体，制备了AFB1-AAC。对AFB1-AAC的柱容量、准确性、重复性和特异性等性能进行评价，并与AFB1-IAC的净化效果进行比较。将优化后的AAC用于莲子样品中AFB1的净化富集，并利用高效液相色谱-光化学衍生荧光检测法(HPLC-PCD-FCD)进行分析检测。

1仪器与试剂
1260系列高效液相色谱-荧光检测器(美国安捷伦公司);0.2μm针筒式滤膜过滤器(天津津腾实验设备有限公司);玻璃纤维滤纸(110mm，1.5μm，青岛普瑞邦生物工程有限公司);DHM200涡旋振荡器(宁波洛尚智能科技有限公司);FE28pH计(上海梅特勒-托利多仪器有限公司);GmbH台式冷冻离心机(德国Sigma离心机有限公司);光化学衍生器(北京华安麦科生物技术有限公司);固相萃取柱管(1mL带凸缘柱管，天津艾杰尔飞诺美公司);黄曲霉毒素B1免疫亲和柱(康源泰博生物科技有限公司)。

2AFB1-AAC的操作流程
将AFB1标准品溶液加样至AAC，依次经过淋洗和洗脱，用HPLC检测洗脱液中AFB1，计算回收率，以筛选AAC的富集净化的最佳条件。首先，用5mL结合缓冲液将AAC活化;然后，将30mLAFB1标准品溶液上样至AAC中，以1mL结合缓冲液淋洗，1mL甲醇洗脱。洗脱液于40℃氮吹至近干，用1mL液相色谱流动相复溶，过0.2μm津腾针筒式滤膜，用HPLC-PCD-FLD检测。

3样品处理
准确称取5g莲子样品(精确至0.01g)和1gNaCl，加入25mL甲醇-水(70∶30，V/V)进行提取，使用涡旋振荡器，以2500r/min振荡20min后，10000r/min离心10min。每管中取5mL上清液，稀释至50mL，用玻璃纤维滤纸过滤，取续滤液，备用。以5mL结合缓冲液活化AAC后，准确移取续滤液30mL上样至AAC，1mL结合缓冲液淋洗，将2～3mL空气通过AAC，1mL甲醇洗脱，收集的洗脱液在40℃氮吹至近干，用1mL液相流动相复溶，过0.2μm津腾针筒式滤膜，转入进样瓶后，用HPLC-PCD-FLD检测。

4结论
核酸适配体具有体外合成、易修饰、批次差异小和便于储存等优点，天津津腾实验设备有限公司了解到本研究通过将氨基修饰的适配体与NHS活化的琼脂糖共价偶合，制备了一种富集净化AFB1的AAC。优化了载样液中有机溶剂含量、载样液的体积和淋洗体积等实验参数，制备了对莲子中AFB1有较好的净化效果的AAC，柱容量达到(334.6±18.2)ng，对莲子加标样品中AFB1分析的平均回收率为100.6%，且具有较好的准确性、稳定性、精密度和重复性。对AFB1-AAC与AFB1-IAC的性能进行了比较，结果表明，AFB1-AAC与AFB1-IAC有相似的净化效果，但AAC可重复使用达20次，且具有很好的重复性。未来希望能通过对固相材料的挖掘，开发以适配体为识别元件的价格更低廉、操作更简便的AAC，为痕量污染物前处理方法提供实用高效的解决方案。

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津腾滤器在测定莲子中黄曲霉毒素B1的作用

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