腹泻性贝毒DSP是有毒赤潮藻类鳍藻属和原甲藻属中一些种类产生的脂溶性多环醚类生物活性物质。腹泻性贝毒主要为大田软海绵酸及其衍生物鳍藻毒素 ，扇贝毒素等大类，可经过贝类等滤食性动物食用后在贝类消化腺内富集。毒素对贝类无害，但人们在食用腹泻性贝毒污染的贝类后，会出现呕吐，腹泻等急性中毒症状。并且，大田软海绵酸经过动物实验证明其具有致癌性，致突变性和免疫毒性。为了满足在现场对贝类样品中的腹泻性毒素进行有效评估，有必要设计一套现场快速检测系统及前处理装置。本文主要以腹泻性贝类毒素中的主要成份OA进行实验。
1 材料与方法
1．1 试剂和仪器
腹泻性贝毒检测试剂盒，甲醇，纯水，便携式离心机，手持式均质器，移液枪，振荡器，高通量前处理装置，快速检测系统，酶标仪。
1．2 高通量前处理系统设计及前处理方法
1．2．1 高通量前处理系统硬件设计
为了减少前处理过程中因实验操作习惯带来的误差，提高样品处理效率，设计了一种高通量前处理装置。前处理装置主要由电路和管路所组成，通过微控制器控制蠕动泵的工作，完成前处理过程中的各个步骤。所设计的高通量前处理装置的结构，使用开关电源为整个系统供电，并通过变压电路为不同工作模块提供电源。微控制器MSP430接收上位机的指令，控制不同的蠕动泵和外接设备完成正常工作，实现对前处理过程中贝肉样品的灌注，过滤以及萃取液的添加和样品的称重，振荡和离心。按照样品前处理的步骤分别进行相对应的功能，可实现4个萃取样品的同时过滤，得到样品的毒素萃取液。
1．2．2 高通量前处理系统软件设计
软件设计包括上位机和下位机软件两部分组成。其中上位机用于对前处理流程的参数进行设置、存储、导入以及对各模块完成功能的顺序进行控制，起到操作者与系统交互的作用，使用LabVIEW平台对上位机软件进行编写; 下位机用于各模块功能的初始
化，与上位机通讯，确定前处理流程的时序及控制各模块的执行，下位机软件由MSP430F149单片机执行，在IAＲfor MSP430平台上使用C语言进行编写。
1．2．3 样品前处理
使用所设计的高通量前处理装置对贝肉样品进行前处理。首先将高通量前处理装置与上位机以及其他外接设备相连接，并完成初始化。使用电子秤称量剥好的贝肉样品，装置将根据得到的贝肉样品重量按1∶5的比例配比80%甲醇溶液并加入贝肉样品中。
1．3 快速检测系统设计及检测方法
1．3．1 ELISA 检测原理
使用ELISA技术对腹泻性贝毒进行检测。将OA和牛血清白蛋白的偶连体固定在多孔板上，加入待测样品后，使待测样品和OA-BSA偶连体竞争性结合经过辣根过氧化物酶 标记的OA抗体 。OA的浓度决定了HRP催化
反应生成的产物的浓度。待反应结束后，加入终止液使溶液显黄色，其颜色的深浅与样品中OA的浓度成正相关关系。根据已知浓度的标准品反应结果绘制标定曲线，通过采集多孔板图像，通过标定曲线对图像进行分析，得到待测样品中OA的浓度结果
2 结论
本文介绍了一种现场高通量前处理装置和快速检测系统的设计方法，利用免疫分析技术中的酶联免疫反应，实现了贝类腹泻性毒素的现场快速筛查。依照现场快速检测的需求设计了高通量前处理装置和快速检测系统。对比了前处理装置处理与实验室手工前处理的标准方法的回收率。使用贝类腹泻性毒素标准品和实际贝肉样品对系统性能进行了测试和标定，实验结果与商用酶标仪进行了比较。结果表明，相比于标准的小鼠法，本文所设计的前处理装置和快速检测系统能够较方便地应用于现场快速检测，并提供直观的数值，从而为现场贝类腹泻性毒素的现场快速筛查提供了一种新的快速，有效的方法和仪器。
