津腾微孔滤膜应用木霉真菌降解褐煤的研究分析

我国褐煤资源量丰富，但直接利用燃烧效率低， 环境污染问题严重，因此褐煤的清洁高效转化技术是今后发展的重要方向。 利用微生物的生长代谢将煤转化为高附加值化学品，具有能耗少，成本低且对环境污染小等特点。因此，深入开展褐煤的生物降解转化技术，对褐煤资源的开发利用具有重要意义。

液态培养条件下真菌对褐煤的降解作用：取250 mL三角瓶，接入液体马丁培养基 100 m，高温灭菌后备用。 菌/煤同时培养：同时向三角瓶中的培养基内接入 100 μL 真菌H-2 孢子液和0.5～1 cm褐煤煤块10 g，共培养14 d。菌/煤差时培养：向三角瓶中的培养基内接入真菌 H-2 孢子液 100 μL，培养 7 d 后加入 0.5~1 cm 褐煤煤块 10 g 继续培养 7 d。 对照组为真菌 H-2 的纯化培养和 10 g 褐煤与培养基的浸润实验。每组设置 3 个平行，均放置在 30 ℃、110 r/min 的恒温培养箱中振荡培养。培养14d结束后，取培养液经天津津腾0.22μm微孔滤膜过滤收集，煤块用纯水将表面附着菌丝剥离清洗干净，烘干备用，用于后续检测分析。

真菌处理前后煤样品的制备和分析：煤样制备好后，根据 GB/T 30732—2014 对煤样进行工业分析，设备型号为湖南三德 SDLA618。 取制备好的原煤和处理后的煤样按照 1∶100 的比例与KBr 充分混合，磨细、混匀、装模，将样品粉末的模具置于压片机上压制成 0.1~1.0 mm 厚的透明薄片并置于准备好的样品架上，采用 FT-IR 光谱仪（岛津IRAffinity-1S 日本）测定煤样的官能团结构特征。 采用 KBr 压片法制样，光谱仪分辨率 0.5 cm-1，测定范围 400~4 000 cm-1。将液体培养液进行离心，10 000 r/min，10 min，取上清液经 0.22 μm 微孔滤膜（天津津腾）过滤，使用紫外/可见分光光度计（尤尼柯 UV-4802，上海）进行扫描，以配制培养基的纯水做基线扫描，扫描范围为 190~1 100 nm，扫描精度 1 nm。 采用高效液相质谱联用仪分析液体样品中有机组成，测试条件为：色谱柱为安捷伦Zorbax C8（1.8 μm×4.6 mm×50 mm），流动相为甲醇和 0.1%甲酸 ，流速 0.5 mL/min，柱温 25 ℃ ， 进样量10 μL。 质谱采集模式为正离子模式，Fragmentor电压 130 V，毛细管电压 3500 V，质荷比扫描范围50~500 m/z。

在不同的处理方式下 Trichoderma sp.H-2对褐煤的降解作用机制存在差异，本最后的实验研究结果可为进一步深入研究褐煤的生物降解转化提供参考。