天津津腾微孔滤膜在菌株生长研究中的应用
1菌株
筛选出类芽孢杆菌，该菌株由郑州轻工业大学食工学院生物催化与转化研究室筛选，于-80℃冰箱甘油管保存备用。挑取菌株划线接种于种子培养基3的固体平板上，置于30℃电热恒温培养箱中培养48h，将平板保存在4℃冰箱备用。
2实验方法
2.1菌株生长培养及甾醇降解
将保藏于斜面培养基的类芽孢杆菌接种至种子培养基，在37℃，180rpm的摇床中活化培养48h。种子培养结束后，接入不同的发酵降解培养基中，以装液量为50mL/250mL三角瓶，10%的接种量接种于37℃，180rpm摇床中进行甾醇降解并测定生物量。
2.2生物量测定方法
微生物培养过程，每隔5-10h（根据生长情况）小时取样一次，测定OD，并留样2ml，经处理后进行液相检测其中的甾醇含量，确定不同时间的甾醇降解率，并绘制微生物生长曲线和甾醇降解动力学曲线。
2.3甾醇含量测定
取发酵后的样品2ml，用乙酸乙酯进行萃取后，常温下挥发干，再用等体积甲醇复溶后，过0.22µm津腾微孔滤膜，再进行相应的高效液相检测，采用ELSD检测器，通过获得的液相峰面积和标准曲线计算相应的甾醇浓度。
3.小结
（1）从碳源、氮源、温度、pH等方面对微生物生长及甾醇降解特性进行了研究，获得了类芽孢杆菌在纯培养单因素试验下，可以降解2g/L的甾醇，降解率达到90.0%以上；同时也确定了其最合适的生长温度（37℃）、pH（7.0）、碳源（葡萄糖6.0g/L）及氮源（酵母粉1.0g/L）浓度。
（2）通过单因素试验，系统研究温度，pH，碳源，氮源，豆甾醇浓度对甾醇降解率的影响。利用Minitab软件进行了PB试验设计，最陡爬坡试验和中心组合试验设计（CCD），得出了最佳降解工艺组合温度40℃，pH值为6.53，豆甾醇浓度为2.15g/L，葡萄糖浓度6g/L，酵母粉浓度1g/L。在此条件下进行3次重复试验，最终甾醇降解率的均值为97.28%，与预测值基本相符，因此经响应面优化后的降解条件是可行的。
筛选出类芽孢杆菌，该菌株由郑州轻工业大学食工学院生物催化与转化研究室筛选，于-80℃冰箱甘油管保存备用。挑取菌株划线接种于种子培养基3的固体平板上，置于30℃电热恒温培养箱中培养48h，将平板保存在4℃冰箱备用。
2实验方法
2.1菌株生长培养及甾醇降解
将保藏于斜面培养基的类芽孢杆菌接种至种子培养基，在37℃，180rpm的摇床中活化培养48h。种子培养结束后，接入不同的发酵降解培养基中，以装液量为50mL/250mL三角瓶，10%的接种量接种于37℃，180rpm摇床中进行甾醇降解并测定生物量。
2.2生物量测定方法
微生物培养过程，每隔5-10h（根据生长情况）小时取样一次，测定OD，并留样2ml，经处理后进行液相检测其中的甾醇含量，确定不同时间的甾醇降解率，并绘制微生物生长曲线和甾醇降解动力学曲线。
2.3甾醇含量测定
取发酵后的样品2ml，用乙酸乙酯进行萃取后，常温下挥发干，再用等体积甲醇复溶后，过0.22µm津腾微孔滤膜，再进行相应的高效液相检测，采用ELSD检测器，通过获得的液相峰面积和标准曲线计算相应的甾醇浓度。
3.小结
（1）从碳源、氮源、温度、pH等方面对微生物生长及甾醇降解特性进行了研究，获得了类芽孢杆菌在纯培养单因素试验下，可以降解2g/L的甾醇，降解率达到90.0%以上；同时也确定了其最合适的生长温度（37℃）、pH（7.0）、碳源（葡萄糖6.0g/L）及氮源（酵母粉1.0g/L）浓度。
（2）通过单因素试验，系统研究温度，pH，碳源，氮源，豆甾醇浓度对甾醇降解率的影响。利用Minitab软件进行了PB试验设计，最陡爬坡试验和中心组合试验设计（CCD），得出了最佳降解工艺组合温度40℃，pH值为6.53，豆甾醇浓度为2.15g/L，葡萄糖浓度6g/L，酵母粉浓度1g/L。在此条件下进行3次重复试验，最终甾醇降解率的均值为97.28%，与预测值基本相符，因此经响应面优化后的降解条件是可行的。
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